Значення полярності в електрофорезі
Полярність є критичним параметром електрофорезу, що визначає напрямок руху молекул білків у електричному полі. Правильне встановлення полярності забезпечує ефективне розділення білків за молекулярною масою та зарядом.
Основні принципи роботи
Під час електрофорезу заряджені молекули мігрують до протилежного електрода:
- Негативно заряджені молекули рухаються до анода (позитивного електрода)
- Позитивно заряджені молекули рухаються до катода (негативного електрода)
Ключові параметри налаштування
Для успішного електрофорезу необхідно:
- Встановити правильну напругу
- Контролювати температуру буферного розчину
- Вибрати відповідний буферний розчин
- Визначити оптимальну тривалість експерименту
- Розмістити зразки у лунки поблизу катода
Вибір буферних розчинів
Рекомендовані буферні системи:
- Трис-гліцин буфер (найпоширеніший)
- MOPS буфер (для низькомолекулярних білків)
- Трис-ацетатний буфер (для великих молекул)
Контроль якості експерименту
Для забезпечення повторюваності результатів слід:
- Використовувати маркери молекулярної маси
- Фіксувати час електрофорезу
- Контролювати струм та напругу
- Документувати всі параметри методики
| Тип електрофорезу | Полярність | Буфер | Напруга (В) | Час (хв) |
|---|---|---|---|---|
| SDS-PAGE | Катод (-) на верху | Трис-гліцин | 100-200 | 45-90 |
| Нативний PAGE | Катод (-) на верху | Трис-гліцин | 80-150 | 60-120 |
| Ізоелектрофокусування | Змінна | Амфоліти | 200-1000 | 120-240 |
| 2D-електрофорез | Змінна | Амфоліти/Трис | 500-3500 | 240-480 |
| Конвекційний PAGE | Катод (-) на верху | Фосфатний | 50-100 | 30-60 |
| Пульс-електрофорез | Змінна | Трис-EDTA | 100-500 | 600-1440 |
| Капілярний електрофорез | Змінна | Боратний | 10-30 кВ | 10-30 |
| Морфологічний PAGE | Катод (-) на верху | Трис-гліцин | 120-180 | 75-120 |
| Градієнтний PAGE | Катод (-) на верху | Трис-гліцин | 150-250 | 90-180 |
| Q-Sepharose PAGE | Змінна | Фосфатний | 100-200 | 45-75 |
